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基於活化蛋白C和凝血?的內皮細胞作用機制研究

  • 作者：于瑤|責編:汪彤彤
  • 出版社：東北大學
  • ISBN：9787551734196
  • 出版日期：2023/11/01
  • 裝幀：平裝
  • 頁數：184
人民幣：RMB 50 元      售價：元
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內容大鋼
    本書通過分子和細胞層面的深入研究，展示了APC和凝血?在生物體中的雙重作用，從而為開發新的治療策略提供了可能性。特別是在嚴重炎症性疾病(如膿毒症、中風和糖尿病)中，這些策略可能極大地改善患者的預后。這些疾病不僅帶來巨大的個人負擔，也對全球衛生系統造成了嚴重的壓力。因此，解析並操縱APC和凝血?的功能，有望對這些疾病的治療產生革命性的影響。
    本書旨在成為一座照亮複雜生物過程的燈塔，為臨床研究人員、生物學家和藥物開發者提供堅實的理論基礎，並指引科學探索的方向。
作者介紹
于瑤|責編:汪彤彤
目錄
第l章  緒論
  1.1  止血機制
    1.1.1  初級止血
    1.1.2  二級止血
    1.1.3  凝血過程的調節
    1.1.4  纖維蛋白溶解
  1.2  凝血?及其多種功能
    1.2.1  凝血?的結構
    1.2.2  凝血過程中的凝血?功能
    1.2.3  蛋白?活化受體
    1.2.4  凝血?在細胞信號傳導中的作用
  l.3  蛋白C及其多種功能
    1.3.1  蛋白C的結構
    1.3.2  蛋白C的激活
    l.3.3  APC的抗凝功能
    1.3.4  APC的細胞保護途徑
    l.3.5  抗凝血和細胞保護性質的分離
  1.4  炎症和凝血
    1.4.1  炎症概述
    1.4.2  炎症激活凝血反應
    1.4.3  凝血影響炎症
  1.5  蛋白激?C
    1.5.1  PKC的結構和活化
    1.5.2  PKc的功能
  1.6  本書的主要工作
第2章  研究方法
  2.1  人類蛋白c變異體的製備
    2.1.1  構建野生型蛋白C載體
    2.1.2  點突變的蛋白C突變體
    2.1.3  XL10-Gold超感受態細胞的轉化
    2.1.4  質粒小規模純化和突變驗證
    2.1.5  質粒大規模純化和定量
    2.1.6  菌群保存
  2.2  重組人類蛋白C的表達
    2.2.1  細胞培養
    2.2.2  HEK 293細胞的穩定轉染
    2.2.3  細胞系的冷凍保存和復甦
    2.2.4  蛋白C表達和收集
  2.3  蛋白C純化
    2.3.1  陰離子交換色譜純化蛋白C
    2.3.2  純化蛋白C的分析
  2.4  .蛋白C變異體的主要特性鑒定
    2.4.1  蛋白c?聯免疫吸附測定(ELISA)
    2.4.2  使用BCA蛋白質測定評估總蛋白質含量
    2.4.3  蛋白C激活
    2.4.4  使用S2366測定法定量化活化蛋白C(APC)
    2.4.5  「APC ELISA」測定蛋白C激活效率
  2.5  校準的自動血栓造影(CAT)檢測
    2.5.1  CAT檢測原理
    2.5.2  正常混合貧血小板血漿的製備

    2.5.3  磷脂囊泡的製備
    2.5.4  使用CAT評估APC變體的抗凝活性
  2.6  PARl裂解評估
    2.6.1  HUVEC提取
    2.6.2  HuvEc培養和傳代
    2.6.3  HUvEC冷凍保存
    2.6.4  總RNA提取
    2.6.5  RNA濃度的測定
    2.6.6  PARleXO?段cDNA編碼片段的生成
    2.6.7  PARlexo?表達載體構建
    2.6.8  PARlexo?表達和分析
    2.6.9  使用IMAC純化PARlexo?
    2.6.10  PARlexo?裂解分析
  2.7  細胞信號傳導分析
    2.7.1  EA.hy926細胞培養
    2.7.2  材料
    2.7.3  Erkl／2磷酸化分析
    2.7.4  內皮細胞滲透性分析
    2.7.5  PKC8小干擾RNA(siRNA)轉染
    2.7.6  PKC蛋白轉位分析
    2.7.7  檢測PKc或磷酸化PKC同工?的免疫檢測
  2.8  統計分析
第3章  APC變體的製備
  3.1  蛋白c變體的製備
    3.1.1  蛋白C變體的生成和表達
    3.1.2  蛋白C的純化
  3.2  蛋白C變體的表徵
    3.2.1  ELISA測定蛋白C的含量
    3.2.2  蛋白C的活化
第4章  APC抗凝活性評估
  4.1  正常血漿中的TF滴定
  4.2  正常血漿中Protac的滴定
  4.3  正常血漿中APc的抗凝活性
  4.4  APC變體在蛋白c缺乏的人血漿中的抗凝活性
  4.5  討論
第5章  APC對PARl的切割活性
  5.1  PARlexo?的生成
  5.2  使用IMAC純化PARlexo?
  5.3  PARleXO?的切割
  5.4  討論
第6章  APC和凝血?對內皮細胞(ECs)的信號傳導反應
  6.1  APC和凝血?對EC中Erkl／2 MAPK的激活
  6.2  APC和凝血?對EC屏障滲透性的調節
  6.3  PARl和EPCR在APC介導的細胞信號傳導中的作用
  6.4  討論
第7章  PKC在APC和凝血?介導的內皮細胞反應中的作用
  7.1  PKC參與PMA、APC和凝血?誘導的Erkl／2磷酸化
    7.1.1  直接PKC激活對Erkl／2磷酸化的影響
    7.1.2  PKC同工?在凝血?誘導的Erkl／2磷酸化中的作用
    7.1.3  PKC在APC誘導的Erkl／2磷酸化中的作用

  7.2  .PKC參與凝血?或APc誘導的內皮屏障調節
    7.2.1  PKC參與凝血?誘導的內皮屏障功能障礙
    7.2.2  PKC參與APC介導的內皮屏障保護作用
  7.3  凝血?或APC引起的PKC激活
    7.3.1  PKC同源物轉位
    7.3.2  PKC磷酸化的評估
  7.4  凝血?誘導的EC屏障破壞依賴於Erkl／2的活化
  7.5  討論
第8章  總結
  8.1  討論
    8.1.1  蛋白C及其變體的表徵
    8.1.2  APC的細胞保護性信號轉導機制及其治療潛力
    8.1.3  靶向PKC的治療前景
  8.2  總結與展望
參考文獻
附錄

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