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分子生物學細胞生物學實驗實戰技巧--哺乳動物細胞表面全長抗體展示技術研發隨記

  • 作者：周辰//楊于軍|責編:王曉義
  • 出版社：中國科學技術
  • ISBN：9787504698902
  • 出版日期：2022/12/01
  • 裝幀：平裝
  • 頁數：250
人民幣：RMB 68 元      售價：元
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內容大鋼
    抗體藥物是當前生物葯中複合增長率最高的一類藥物，成為全球藥物研發的熱點。
    抗體藥物的快速發展得益於技術的進步。例如，各種展示技術、轉基因人源化動物、單細胞聚合?鏈式反應（PCR）和單細胞測序等。本書作者多年來一直從事哺乳動物細胞表面抗體展示技術的研究，克服了構建全長全人源抗體庫和特異性抗體篩選中的關鍵技術，建立了一種新型的抗體展示技術平台，能在哺乳動物細胞表面展示全長全人源雙價抗體。而且，這個系統的每一個細胞只展示一種抗體，從而可以從抗體庫中直接定量篩選高表達、高親和力的抗體，同時巧妙地在抗體重鏈與TM之間插入一個Furin切割序列（FCS），通過細胞內天然含有的Furin?就可以特異性地部分切割FCS?段。由於是部分切割，載體表達的抗體就有一部分展示在細胞表面，而另一部分則成為分泌型抗體進入細胞培養液中。在利用流式細胞儀篩選特異性抗體的同時，可獲得相應的可溶性抗體進行功能測定，加速抗體葯的開發。
    在該平台的研發過程中，作者深刻體會到實驗技巧對實驗成功的重要性。因此，本書在以隨記的形式介紹哺乳動物細胞表面抗體展示技術的同時，用較大的篇幅介紹了研發過程中應用的許多分子生物學細胞生物學實驗的實戰技巧，並特別編寫了「實戰技巧專題討論」一章，希望從思路技巧和操作技巧方面給讀者以啟示，達到舉一反三的效果，創造更好、更有效的方法。
    本書為從事抗體研究的人員，同時也為從事分子生物學細胞生物學實驗的人員提供了非常實用的參考。
作者介紹
周辰//楊于軍|責編:王曉義
目錄
引言
第一章  建立哺乳動物細胞表面抗體展示技術平台
  第一節  多樣化的抗體篩選技術
    一、雜交瘤技術
    二、B淋巴細胞單克隆技術
    三、細胞表面抗體展示技術
    四、哺乳動物細胞表面全長抗體展示技術
  第二節  全長抗體在哺乳動物細胞表面的展示和分析
    一、單基因表達系統的選擇
    二、分泌型全長抗體的表達和分析
    三、展示型全長抗體的表達和分析
    四、抗原與展示型抗體的結合具有劑量依賴性
  第三節  同步表達展示型和分泌型抗體
    一、FCS（Furin切割序列）
    二、表達載體的設計和構建
    三、抗體表達細胞
    四、展示型抗體的分析
    五、分泌型抗體的分析
第二章  哺乳動物細胞表面抗體展示技術平台的應用
  第一節  篩選抗原特異性抗體
  第二節  分析不同抗體的表達強度
    一、抗體的選擇
    二、具體的實驗和分析過程
  第三節  篩選高親和力抗體
  第四節  分析鑒定中和抗體
第三章  應用哺乳動物細胞表面抗體展示技術優化抗體親和力
  第一節  隨機突變展示型抗體基因庫的構建及分析
    一、抗體及突變位點的選擇
    二、突變方案及引物設計
    三、抗體基因庫的構建及分析
  第二節  細胞水平抗體庫的構建及高中和活性抗體的篩選
    一、細胞庫的構建及分析
    二、陽性抗體克隆的分選與分析
    三、陽性抗體突變位點氨基酸的變化與中和活性的提高
第四章  展示型全長人源一級抗體庫的構建及分析
  第一節  表達載體的構建
    一、啟動子的選擇
    二、限制性內切?的選擇
  第二節  抗體基因庫的擴增
    一、基本思路
    二、設計合成擴增引物
    三、外周血淋巴細胞總RNA提取
    四、基因庫cDNA第一鏈的合成
  第三節  抗體庫的常規構建
  第四節  抗體庫的快速構建
    人源抗體重鏈可變區和全長輕鏈基因擴增引物的分組
第五章  定向快速高效多片段分子克隆與二級抗體庫的構建
  第一節  需求與可行性
  第二節  雙表達載體的設計與構建
    一、雙表達載體需要的功能組分

    二、雙表達載體的設計
    三、引物的設計及DNA片段的PCR合成
    四、4片段定向連接構建雙表達載體
    五、分析雙表達載體的抗體表達功能
    六、4個片段的自我連接與定向連接分析
    七、4片段定向連接效率分析
  第三節  用4片段定向連接快速高效構建二級抗體庫
第六章  乙型肝炎病毒表面抗原特異性抗體的篩選
  第一節  從抗體庫篩選特異性抗體的思路
    一、一級抗體庫的特點及篩選難度
    二、二級抗體庫與定點整合系統的局限性
    三、從細胞展示抗體庫中篩選特異性抗體的設想
    四、從定點整合二級免疫抗體庫開始是一個可行的方案
  第二節  乙型肝炎特異性一級庫的構建及分析
    一、為什麼選擇篩選乙型肝炎病毒表面抗原特異性抗體
    二、PBMC的需求及總RNA的提取
    三、一級抗體庫的庫容及質量分析
  第三節  雙表達定點整合乙型肝炎特異性抗體庫的構建及分析
    一、載體水平定點整合乙型肝炎特異性抗體庫的庫容及質量分析
    二、定點整合抗體穩定表達細胞庫的構建及質量分析
    三、穩定表達細胞庫的質量分析及保存
  第四節  乙型肝炎表面抗原特異性抗體的篩選與鑒定
    一、抗原的確定和處理
    二、表達抗HBsAg抗體細胞的富集
    三、表達抗HBsAg抗體單細胞克隆的分析鑒定
第七章  實戰技巧專題討論
  第一節  分子生物學研究實驗材料的特點及操作技巧
    一、DNA與PCR
    二、RNA與基因克隆
    三、蛋白質的穩定性及其變性
    四、幾種特殊情況下的實用技巧
  第二節  影響小提RNA質量和產量的因素
    一、RNA?與RNA的質量產量
    二、總RNA小提技巧
  第三節  質粒DNA的提取與鑒定
    一、影響小提質粒DNA產量質量的因素
    二、質粒DNA小提技巧
    三、陽性細菌克隆的篩選
    四、質粒DNA中提實例
  第四節  瓊脂糖凝膠電泳操作技巧
    一、DNA瓊脂糖凝膠電泳的考慮因素
    二、DNA瓊脂糖凝膠電泳操作技巧
    三、實例分析：用一塊凝膠同步分析從0.5kb到10kb的DNA片段
  第五節  抗體庫的構建與分析
    一、構建大容量抗體基因庫需要考慮的因素
    二、抗體庫輕重鏈的配對分析與保存
    三、抗體穩定表達細胞庫的構建、染色、分析和分選
  第六節  細胞生物學研究實驗材料的特點及操作技巧
    一、細胞的培養與傳代
    二、細胞的凍存與復甦

參考文獻

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