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現代分子生物學實驗(第2版)

  • 作者:編者:鄭偉娟
  • 出版社:高等教育
  • ISBN:9787040504804
  • 出版日期:2019/08/01
  • 裝幀:平裝
  • 頁數:265
人民幣:RMB 32 元      售價:
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內容大鋼
    本書的編寫注重實用性和創新性統一,在實驗內容的編排上不再按照「基礎實驗+綜合實驗」的基本模式,而是依據分子生物學研究的主要內容,分為特定基因的克隆、克隆基因的表達和表達產物的純化、基因的編輯和表達水平的調控、基因表達水平的檢測和基因功能的研究、蛋白質與蛋白質的相互作用、DNA與蛋白質的相互作用、小分子與蛋白質的相互作用七章,每章整合若干實用的分子生物學研究技術實驗,使學生對每一個實驗的目的和適用領域更加明確,也便於從事不同研究方向的研究生和青年教師快速選擇相關實驗技術參考借鑒。
    書中既包含了分子生物學最為基礎和常用的實驗技術,如基因的克隆、表達和純化,定點突變、逆轉錄PCR、western blotting、pull—down、免疫沉澱、熒光顯微鏡使用、EMSA、染色體免疫共沉澱等,也涵蓋了目前分子生物學研究中先進的研究技術和研究方法,如酵母雙雜交技術、二維電泳、RNA干擾、實時熒光定量PCR、流式細胞儀分析、熒光共振能量轉移(FRET)技術等。
    為方便讀者使用,每一章前都有綜述,介紹相關的研究背景;每個實驗都有實驗原理的介紹;實驗步驟中特彆強調操作的注意事項和實驗取得成功的關鍵;多數實驗附有實驗結果,供選用本書的師生參考。
    本書適合作為高等院校生命科學類及相關專業分子生物學實驗課程的教材使用,也可供相關科研及實驗技術人員參考。

作者介紹
編者:鄭偉娟

目錄
第l章  特定基因的克隆
  附1.1  Bad基因介紹
  實驗1.1  從核酸資料庫中獲得mBad基因編碼序列
  實驗1.2  從細胞中提取總RNA
  實驗1.3  逆轉錄獲得小鼠B16F10細胞的cDNA
  實驗1.4  PCR擴增目的基因mBad
  附1.2  mBad基因PCR引物的設計
  實驗1.5  PCR產物的瓊脂糖凝膠電泳回收
  實驗1.6  SDS鹼裂解法提取質粒DNA
  實驗1.7  用質粒DNA小量抽提試劑盒製備質粒DNA
  附1.3  克隆載體的選擇
  實驗1.8  DNA的限制性?切和?切產物的回收
  附1.4  ?切位點的選擇
  實驗1.9  連接
  附1.5  平端DNA的連接反應
  實驗1.10  轉化
  實驗1.11  陽性重組子的篩選以及測序驗證
第2章  克隆基因的表達和表達產物的純化
  實驗2.1  His6一EGFP在大腸桿菌中的表達和純化
  附2.1  融合蛋白表達載體pHis—EGFP的構建及融合蛋白的親和純化結果
  實驗2.2  GST-EBFP融合蛋白在大腸桿菌中的表達和純化
  附2.2  GsT—EBFP的純化結果
  實驗2.3  GST—EBFP在巴氏畢赤酵母中的表達
  附2.3  pPIC-GST-EBFP重組質粒的構建、鑒定
  實驗2.4  GST-EBFP在昆蟲細胞中的表達純化
  附2.4  重組AcNPv-EGFP病毒的構建與篩選
第3章  基因的編輯和表達水平的調控
  實驗3.1  用重疊延伸PCR法進行EGFP基因的定點突變
  附3.1  重疊延伸PCR法基因定點突變的實驗結果
  實驗3.2  用單管大引物PCR法進行EGFP基因的快速定點突變
  附3.2  單管大引物PCR法基因定點突變的實驗結果
  實驗3.3  利用CRISPR/Cas9基因組編輯技術敲除鼠源細胞系FADD基因
  實驗3.4  人DNMn基因干擾質粒shRNA真核表達載體的構建
  附3.3  干擾質粒的設計
  實驗3.5  質粒DNA的大量純化
  實驗3.6  mBad基因在293T細胞中的瞬時表達
  實驗3.7  脂質體轉染哺乳動物細胞MCF-7及穩定轉染細胞系篩選
  附3.4  質粒轉染結果
第4章  基因表達水平的檢測和基因功能的研究
  實驗4.1  實時熒光定量PCR法檢測DNMn基因mRNA表達水平
  附4.1  熒光定量PCR實驗結果
  實驗4.2  western blotting檢測瞬時轉染基因的表達
  實驗4.3  熒光顯微鏡分析特定蛋白質的表達及定位
  附4.2  I.PS刺激下RAW264.7細胞中NF-KB(p65)的定位改變
  附4.3  激光共聚焦顯微鏡和超高分辨顯微鏡簡介
  實驗4.4  流式細胞儀檢測紫杉醇對A549細胞周期的影響
  附4.4  紫杉醇處理對A549細胞周期的影響
  實驗4.5  流式細胞儀檢測臍靜脈內皮細胞增殖
  附4.5  流式細胞儀檢測臍靜脈內皮細胞的增殖
  實驗4.6  流式細胞儀檢測細胞凋亡

  附4.6  流式細胞儀檢測Jurkat淋巴瘤細胞的凋亡
第5章  蛋白質與蛋白質的相互作用
  實驗5.1  酵母雙雜交體系發現FADD與Fas的相互作用
  實驗5.2  二維電泳比較FADD和FADD細胞株的蛋白質表達差異
  附5.1  SDS一聚丙烯?胺凝膠的經驗配方
  附5.2  二維電泳常見問題與解決辦法
  實驗5.3  GST pull—down驗證FADD與Fas的相互作用
  附5.3  GST pull—down驗證FADD與Fas相互作用的結果示意圖
  實驗5.4  免疫共沉澱分析FADD與Fas相互作用的結構域
  附5.4  Fas與FADD不同結構域相互作用的C口IP結果示意圖
  實驗5.5  熒光共振能量轉移(FRET)技術分析FADD與Fas相互作用
  實驗5.6  利用噬茵體?庫展示技術篩選與鏈霉親和素特異性結合的氨基酸序列
第6章  DNA與蛋白質的相互作用
  實驗6.1  EMSA分析轉錄因子NF-kB與DNA結合序列的結合
  實驗6.2  染色質免疫沉澱(ChIP)分析NF-kB與WM同基因啟動子序列的結合
  實驗6.3  報告基因檢測技術分析不同細胞中PSMA基因的啟動子活性
第7章  小分子與蛋白質的相互作用
  實驗7.1  等溫滴定量熱法測定谷胱甘?轉移?與谷胱甘?的結合
  實驗7.2  表面等離子共振技術測定穿心蓮內酯與BAX蛋白的結合
  實驗7.3  細胞內熱遷移法測定穿心蓮內酯與BAX蛋白在細胞內的結合
  附7.1  穿心蓮內酯(Andro)處理下BAX的胞內熱遷移實驗結果
  實驗7.4  微量熱泳動法測定穿心蓮內酯與BAX蛋白的結合
附錄I  常用溶液配製
附錄Ⅱ  網路資
附錄Ⅲ  常用儀器及供應商
附錄Ⅳ  著名生物試劑公司及其特色產品
附錄Ⅴ  常用工具?
附錄Ⅵ  實驗室常用技術參數資料

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